藥品生產企業微生物實驗室（shì）設計

1、前言
藥品檢驗實驗室通常包含理化實驗室和微生物實驗室兩部分；理化實驗室運用物理、化學的方（fāng）法對（duì）生（shēng）產用的原輔料、包裝材料（liào）、中間（jiān）體及成品等進行鑒別、含量測定等分析和檢驗，其結果作為（wéi）檢品（pǐn）是否符合法定要求和企業內（nèi）部質量標準的依據（jù）。
微生物實驗室一般具有（yǒu）以下功能：
①按《中國藥典》[1]要求，進行微生物檢驗方法的驗（yàn）證、無菌檢查、微生物限度檢查、抗生素效價的微生物檢定（dìng）、青黴素酶（méi）及其活力測定。
②按現行《藥品生產質量管理規範（fàn）》的要求，對醫藥工業潔淨室的（de）潔淨度進行微生物測定，對無菌生產區環境日常動態監測以及生產過程中其他需要進行微生物檢測的地（dì）方（fāng），如對無菌過濾（lǜ）器的驗證（zhèng）、環境及設備（bèi）消毒效果的驗證、滅菌效果的驗證、無菌藥品包裝密封性驗證中微生物挑戰性試驗等（děng）。
③細菌內毒（dú）素檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖不（bú）是檢查微生物（wù），但它們對檢查環境（jìng）有較高的要求（qiú），通常設在微生物實驗室（shì）。
2、微生物實驗室設（shè）計的有關要求
《藥品（pǐn）生產質量管理規範》[2]要求藥品生產（chǎn）企業應負責藥品生產全過程的質量管理和（hé）檢驗，並配備（bèi）與藥品生產規模、品種、檢驗要求相適應的人員、場所、儀器、設備。在進（jìn）行微生物實（shí）驗室的設計時，應了解檢驗流程、過程性質、有關標準規範的規定等，結合藥品生產企業生產（chǎn）品（pǐn）種、檢驗工（gōng）作量的大小合理布置相（xiàng）應的微（wēi）生物檢驗功能間。
在藥品的微生物學檢驗中，為了保證檢（jiǎn）測結（jié）果的準確、可靠，針對微生物學檢驗產生（shēng）影響的幾種因素需要采取相應的（de）措施（shī），通常為以下幾種：
①藥品本身的抑菌性或藥品（pǐn）中防腐劑（jì）的抑菌性。它們會掩蓋無菌藥品已受汙（wū）染的事實或造成低於實際汙染水平的菌檢結果。通常采用生長比較法，在實際檢驗條件下，通過比較對照接種試驗菌或陽性菌在有無（wú）供試品的狀態下的生長情況，來驗證供試品在該檢驗方法下的抑菌性。
②標準（zhǔn）菌種（試（shì）驗菌或陽（yáng）性菌）製（zhì）備（bèi）與（yǔ）傳代、種類及生長（zhǎng）狀態需符合現行《中（zhōng）國藥典（diǎn）》要求。
③培養基的促菌生長能力：培（péi）養基應具備廣譜性（xìng），有助（zhù）於檢品中所有存活微生物的生長。通過接種不同試驗菌並（bìng）觀察它們的生長（zhǎng）狀態，進行（háng）培（péi）養（yǎng）基靈敏度驗證試驗。
④檢驗器具，如過濾係統的濾器（qì）、濾膜性質、材質等性能，淋洗液、稀釋劑、培養（yǎng）基的無菌（jun1）性及操作（zuò）程序等，通（tōng）常進（jìn）行陰性對（duì）照試（shì）驗來（lái）檢驗其影響。
⑤培養條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測環境應符合相關要求。
2.1無菌檢查實驗室
2.1.1用途
用於檢查藥典要求無菌的藥品、醫療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌。
2.1.2《中國藥典》對無（wú）菌（jun1）檢查實驗室要求
無菌檢查（chá）應在環境潔（jié）淨度10 000級下的局部（bù）潔淨度100級的單向流空氣區域內或隔離係統中進行，其全過程必須嚴格遵守無（wú）菌操作，防止微（wēi）生物汙染（rǎn）。單向流空氣區、工作台麵及環境應定（dìng）期按《醫藥工（gōng）業潔淨室（區）懸浮粒（lì）子、浮遊菌和沉降菌的測（cè）試方（fāng）法》的現行國家（jiā）標準進行潔淨度驗證。隔離係統按相關的要求進行（háng）驗證，其內（nèi）部環境的（de）潔淨度須（xū）符合無菌檢（jiǎn）查的（de）要求（qiú）。
2.2微生物限度檢查實驗室
2.2.1用途
用於檢查非規定（dìng）滅菌（jun1）製劑及其原料、輔（fǔ）料受微（wēi）生物（wù）汙染的程度。檢查項目包括細菌數、黴菌數、酵母菌數及控製菌（jun1）檢查。
2.2.2《中國藥典》
對微生（shēng）物限度檢查實驗室的要求（qiú）
微生物限度（dù）檢查應在環境潔淨（jìng）度10 000級下的局部潔淨度100級的單向流空氣區域內進（jìn）行。檢驗（yàn）全過程必須嚴格遵守無菌操（cāo）作，防止再汙染。單向流空氣區域（yù）、工作台麵及環境應定期按《醫（yī）藥工業潔淨室（區）懸（xuán）浮粒子、浮（fú）遊（yóu）菌和沉（chén）降菌的測試方法（fǎ）》的現行國家標準進（jìn）行潔淨度驗證。
2.3抗生素效價的微（wēi）生物檢定室
2.3.1用途
在適宜條件下，根據量反應平行線原理設計，通過檢測抗（kàng）生素對微生物的抑製作用，計算抗生素（sù）活性（效價）。
2.3.2《中國藥典》[1]對抗生（shēng）素效價的微生物檢定（dìng）室的環境潔淨度未有明確規（guī）定要求
在國家食品藥品監督管理局2000年9月頒發的《藥品檢驗所（suǒ）實（shí）驗室（shì）質量管理（lǐ）規範（fàn）（試行）》中第十八條中規定有“抗生（shēng）素微生物檢定實驗室分為半無菌操作間和緩衝間。半無菌操作間設有紫外線燈，操作台宜穩固，並保持水（shuǐ）平。實驗室內應（yīng）光線明亮，並有控製溫度、濕度的設備”。通常（cháng）按潔淨度100 000級設計。
抗生素效價的微（wēi）生（shēng）物檢（jiǎn）定實驗所（suǒ）用燒杯、漏鬥、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管（guǎn）等器皿應與其他（tā）器皿分開洗滌，檢定用平板（bǎn）與其他培養基（jī）平板也應分開洗（xǐ）滌，防（fáng）止抗（kàng）生素對其他微生物培（péi）養的汙染。
2.4細菌內毒（dú）素檢查用（yòng）室
2.4.1用途
利用鱟試（shì）劑來檢測或量化由（yóu）革蘭陰（yīn）性菌產生的細菌（jun1）內毒素，以判斷（duàn）供試品中細菌內毒素的*是否符合規定。適用於某些不能用家兔進行熱原檢測的品種，如放射性藥劑腫瘤抑製劑等，因為這些製劑具有細胞毒性而有一定的生物效應。目前一般認為特別適用於生（shēng）產過程中的熱原（yuán）控製（zhì），因為該（gāi）檢查法操作簡單，實驗費用少，結果迅速可得。但該檢查法對革蘭陰性菌（jun1）以外的內毒素不夠敏感，故尚（shàng）不能代替家兔熱原法。
2.4.2《中國藥典》中（zhōng）要求
進行細菌內毒素含量測（cè）定試（shì）驗所用的器皿需經（jīng）處理，以（yǐ）去除可能存在的外源性內毒素，試驗（yàn）操作過程應防止微生物（wù）的汙染，在清淨（jìng）環境中進行，在（zài）層流工作台內（nèi）操作。實驗前（qián），須用肥（féi）皂洗手，用75%乙（yǐ）醇（用叔丁醇代替乙（yǐ）醇）棉球（qiú）消毒。但《中國藥典》中未對（duì）細菌（jun1）內毒素檢查（chá）用室（shì）的環境潔淨度明（míng）確規定要求。一般來說細菌內（nèi）毒素檢查（chá）用室為半無菌操作間：室（shì）內設滅菌紫外燈，潔淨度要求一般（bān）為100000級。也有一些藥廠為了節省能耗而將其設置為一般環境。
2.5不溶性微粒檢（jiǎn）查用室（shì）
2.5.1用途
在可見異物檢查符合規定後，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數（shù）量。
2.5.2《中國藥典》[1]要求
試驗操作環境（jìng）應不得引入微粒（lì），測定前的（de）操作應在層流淨化台下進行（háng）。玻璃儀器和（hé）其他（tā）所需的用品應潔淨無微粒，本（běn）法（fǎ）所用微粒（lì）檢查用水（或溶（róng）劑）使用前須經不大於1.0 um的微孔濾膜濾過。
2.5.3因《中國藥典》要求（qiú）注射用水須進行細菌內毒素檢測，因此溶液型靜脈用注射劑的不（bú）溶性微粒檢查可與細菌內毒素檢查用室設成一間，不（bú）用專設一室，配置相應的層流淨化台。
3、相關（guān）問題（tí）及案例
3.1陽性接（jiē）種室
（1）微生物檢驗離不開對標準菌種及所（suǒ）檢測的菌種進（jìn）行各種處理，如培（péi）養基的靈敏度檢查、無菌檢查及微生物限度檢查方法的驗證、陽性（xìng）對照（zhào）、抗生素效價的微生物檢定時菌種及菌懸液製備、轉接種（zhǒng）等，這些活動要直接處理（lǐ）微生物菌種，在一定條件下，許多種類都是病原（yuán）菌，因此有關微生物暴露性操作活動盡（jìn）可（kě）能在生物安全櫃內（nèi）進（jìn）行。所有染菌物品、培養物均應經高壓滅菌處理後再清洗。
（2）無菌檢查及微生（shēng）物限度檢查中陽性對照菌液加入（rù）含供試品（pǐn）的（de）培養基的操作，不能在檢測供試品的無菌室或淨化台（tái）上進行，以（yǐ）免汙染供試品及操作環境。可設置一（yī）間陽性接種室進行（háng）上述操作（zuò）。以前有的將其設置為（wéi）一般環境；有（yǒu）的根本（běn）就未專設此室。《中國藥典》（2005年版）頒發後，目前許多人認為將其設置為潔淨度10 000級，設置單獨的人淨、物淨係統。
3.2無菌室
《中國藥典》要求無菌藥品的（de）無菌（jun1）性檢查（chá）室、非（fēi）無菌藥品的微生物限度檢查室的（de）環境潔淨度都為10 000級（局部潔淨度100級），通常都稱為無菌（jun1）室；若某藥廠（chǎng）既生（shēng）產無菌藥品，也生產非無菌藥品，為防止非（fēi）無（wú）菌藥品供試品對無菌藥（yào）品的無（wú）菌性檢查的汙染，有兩種方式：
①如果同時進行這兩類藥品的檢驗，將這兩種無菌室分開設置二套，使用各自的（de）人淨、物淨係統。此種方式無菌室利用率不高。
②通常隻設一套無菌室，分期進行這兩類藥品的檢驗，合理安排（pái）檢驗規程、嚴格操作並（bìng）經驗證，確保不對無菌藥品的無菌性檢查產（chǎn）生汙染。
3.3隔離係統
《中國藥典》[1]無菌（jun1）檢查法中被為可（kě）使用的設施（shī），它能提（tí）供並保持與外界環境（jìng）隔離的百級潔淨度的操作環境。隔離操作器所處環境的級（jí）別取決於它們的設計及其應（yīng）用。美國藥典並不要求它安裝在潔淨區/室，但應控製無關人（rén）員進入其所處房間；歐盟GMP則建議應將它放置於（yú）100 000級的環境中。采用隔離操作技術能zui大限度降低操作人員和外界環境對潔淨空間（jiān）的影響（xiǎng）。它既可（kě）用於無菌實驗，又可用於（yú）其（qí）他需要高潔淨（jìng）度的多種研究和實驗。但隔離操作器的性能與操作程序的驗證尤為（wéi）重（chóng）要，隔離用袖管/手套係統應進行常規監測，這包括經常進行（háng）必要的檢漏（lòu）試驗。隔離係統的諸多優勢如潔淨區域的隔離化、自動化、小型化等將使其成（chéng）為無菌區的（de）發展未來。
3.4培養室
用來放置培養各類微生物生長的細（xì）菌（jun1）培養箱（xiāng）和真菌（jun1）培養箱。大多數將其設置（zhì）為一般（bān）環境；也有（yǒu）的（de）將其潔淨度設置為100 000級。設計時根據藥廠相關部門的要求進行。