空氣（qì）淨化係統驗證--潔淨度的測定

驗證通常是由安裝確認（IQ）、運（yùn）行確認（OQ）、性能確認（PQ）組成的。其（qí）中儀器儀表（biǎo）的校準可以歸屬於安裝確認，也可（kě）以單獨（dú）成為一個（gè）組（zǔ）成部分，性（xìng）能確（què）認是做後的判斷。在生產或工（gōng）藝驗證中，性（xìng）能確（què）認是檢驗該工藝（yì）過程的結（jié）果；在生產環境驗證中，性（xìng）能確認是對空氣淨化係統是否能達到規（guī）定的潔淨度做出判（pàn）斷，即合格還是不合格，因此性能確認也就是常規意（yì）義上或狹義上的“驗證”，也就是（shì）說，平（píng）時所做的不包括安裝確認及運行確認的（de）驗證實際上就是“性能確認”。在空氣（qì）淨化係統（tǒng）驗證（zhèng）中，為了不引起誤解，將性能確認稱為“潔淨度測定”。醫藥工業（yè）潔淨室的潔淨度包括懸浮粒子和微生物兩（liǎng）個方麵，因此潔（jié）淨度的測定主要進行懸浮（fú）粒子和微生物的測定。
1、懸浮粒子測（cè）定
懸浮粒（lì）子的測定（dìng）可參見國家標（biāo）準（zhǔn）GB/T 16292--2010《醫藥工業潔淨室（shì）（區）懸浮粒子的測試方法（fǎ）》（以下簡稱（chēng）《粒子測試方法》），要點歸納如下：
（1）懸浮粒子的測定方法
主要有顯微（wēi）鏡法及自（zì）動粒子計數法。
①顯微鏡法。顯（xiǎn）微鏡法是用（yòng）抽氣泵抽取潔淨室內的空（kōng）氣，把在測定用的濾膜（mó）表麵上捕集到的粒（lì）徑中大於5um的粒子用顯微鏡計數的方法。用（yòng）顯微鏡法（fǎ）測定的直徑為粒子的大直徑。
②自動（dòng）粒子計數法。自動粒子計數法是把潔淨室中粒徑大於0.5um的粒子，按懸浮狀態連續計數的方法。在（zài）自動粒子計數法中規定懸浮粒子的粒徑等於標準粒子光散射量的球的相當直徑。自動粒（lì）子計數器為了保持其特性，需定期用聚苯乙烯膠乳進行（háng）脈衝校準及流量校準。
（2）懸浮粒子潔淨度監測
懸浮粒子潔（jié）淨度監測的采（cǎi）樣（yàng）點數目及（jí）其布置（zhì）應根據產品的生（shēng）產及工（gōng）藝關鍵操作區設置。一般對於高效過濾器裝在末端的空氣淨化係統及層流罩，隻需在工作（zuò）區（離地0.7～1m處）設置測點即可；而高效過濾器裝在空調器內及末端為亞高效（xiào）過（guò）濾器（效率≥95%）的空（kōng）氣淨化係統，除在工作區設（shè）置測點外，還需（xū）在每個送風口（kǒu）處（離開風口約0.3m）設置一個測（cè）點。
懸浮粒（lì）子潔淨度測定的小（xiǎo）采樣（yàng）量和少采樣點數目參見《粒子（zǐ）測試方法》的規定。
（3）懸浮粒子潔淨度（dù）級別的結果判定
結果（guǒ）評定參見《粒子測試方法》規定的兩個條件。需要說明的是，《粒子測試方法》的標準未說明是日常監（jiān）測還是驗證。一般來說，驗證要（yào）求（qiú）應嚴一些，它是（shì）根據動、靜（jìng）比來（lái）確（què）定合（hé）格標準的。測試狀態有靜（jìng）態和動態測試兩種。
①靜（jìng）態測試是在潔淨室（或潔淨區）空氣淨化係（xì）統已處於正常運行狀態，工藝設備（bèi）已安裝，在潔淨室（或潔（jié）淨（jìng）區）內沒有生產人員的（de）情況（kuàng）下進行測試（shì）。
②動態測試是在潔淨室（或潔淨區）已處於正常生產狀態下進行測試。
2、微生物測定
微生物測定的目的是確定浮遊的生物微粒濃度和生（shēng）物微粒沉降密度，以此來判斷潔淨室是否達到規定的潔淨度。因此微生物測定有測定浮遊菌和測定沉降菌兩種方法。
細菌（jun1）通常肉（ròu）眼看不見，可將它們采集或沉降到培（péi）養基中培（péi）養。細菌（jun1）培養時，由一個或幾個細菌繁殖（zhí）而成的一細菌（jun1）團稱為菌落形成單元數（CFU），也稱菌落數。浮（fú）遊菌用（yòng）計數濃度表示（CFU/L或CFU/m3），沉降菌用沉降濃度表示［（CFU/（皿.min）］。
浮遊（yóu）菌與沉降（jiàng）菌的關係存在著（zhe）以下近似公式（shì）：
Ng=NV_sFT
式中，Ng是在F麵積上的細菌沉（chén）降數，CFU
    N是在空氣中的浮遊菌濃度，CFU/cm³
    V_{s是含菌粒（lì）子沉降速度，cm/s
    F是沉降麵（miàn）積，}cm^{2
    T是沉降時間，s
（1）浮遊（yóu）菌的測定
浮遊（yóu）菌（jun1）的測定可以參照國家標準GB/T 16293-2010}《醫藥工業潔淨室（區）浮遊菌的測試方法》（以（yǐ）下簡（jiǎn）稱《浮遊菌測試方法》）。重點歸納如下：
①浮遊菌測試是（shì）通過收集懸浮在（zài）空氣中的生（shēng）物性微粒，通過專門的（de）培（péi）養基，在適應（yīng）的生（shēng）長（zhǎng）條件下，讓其繁殖到可見的菌落進行計數，從而判（pàn）定潔淨（jìng）環境中單位體積空氣（qì）中（zhōng）菌落數的多（duō）少。
②浮遊菌測定需有專門的采樣器、真空抽氣（qì）泵等設備，浮（fú）遊（yóu）菌采樣器常用撞擊法中的狹縫式采樣器。
③浮遊菌采（cǎi）樣器必須要有流量計和定（dìng）時器，並嚴格（gé）按儀器說（shuō）明書的要求定（dìng）期進行校驗和操作（zuò）。
④浮（fú）遊菌測定的采樣點及數目與懸浮粒子（zǐ）測定相同，即在同懸粒子測定（dìng）時相同的測定（dìng）點采樣。
⑤浮遊菌潔淨度測定的小（xiǎo）采（cǎi）樣量和少采樣點數目參見《浮遊菌測試方（fāng）法》的規定。
⑥浮遊（yóu）菌潔（jié）淨度（dù）的結果評（píng）定參見《浮遊菌測試方法》的規定。
（2）沉降菌的測定
沉降菌是用暴露法收集（jí）降落在培養皿中的生物性微粒，加以（yǐ）培養繁殖後計數得到的。沉降菌的測定可參見國家（jiā）標準GB/T 16294-2010《醫（yī）藥工業潔淨室（shì）和潔淨區中沉降菌的（de）測試方法》（以下（xià）簡稱《沉降菌測試方法》）。重點歸納如下：
①沉降菌測定的設備主要是90mm*150mm玻璃培養（yǎng）皿（mǐn）和各種培養基（jī）。
②沉降菌測定（dìng）的培養皿應布置在有代表性的（de）地方和氣流擾動小的地方，其少采樣點數目見下表：

在滿足少測（cè）點（diǎn）數的（de）同時，還要（yào）滿足少培養皿數，如下表所示。不論麵（miàn）積大（dà）小、作為一（yī）個被測對象，都應該滿足這個要求。

③采樣方法及培（péi）養。將培養皿按要求放置後，打開平皿蓋，使培養基表麵暴（bào）露30min後，將平皿蓋蓋（gài）上，然後在30～35℃的條件下培養48h計數。
④結果計算：M=ΣM_i/n
式（shì）中，M為平均菌落數，CFU
      M_i為1,2,3，…，n號平皿菌落數
      n為平皿總數
（3）物（wù）體表麵微生物測試
此測試的（de）目的是確定物體表麵微生物汙染（rǎn）的程（chéng）度。一般有棉簽間（jiān）接取樣後培養和直接接觸法取樣兩種（zhǒng）測試方法（fǎ）。
接觸法使用羅達克培養皿，測試方法是將培養皿直接接觸需采樣的物體表麵，培養（yǎng）後長出菌落。這（zhè）個測試技術適用（yòng）於平整光滑的表麵。
這項測試應在去汙染程序後進行。但瓊脂培養基留在物（wù）體表麵上終究是個（gè）問題。因此，采（cǎi）樣後應馬上進行去汙染。每隻（zhī）培養皿需做好標誌，指明采樣點的確切位置。應注意（yì）房間裏的標誌供現（xiàn）在和（hé）將來參考。