無菌室浮遊菌測試標準操作程序

1、目的：建立無菌室浮遊菌測試標準操作程（chéng）序，規範無菌室浮遊菌（jun1）的檢測（cè）。
2、範圍：適用於無菌室（包括潔淨工作台）浮遊（yóu）菌的測試和環境驗證（zhèng）。
3、職責：QA、QC人員遵照執行。
4、內容：
4.1 參考標準：GB/T 16293-2010
4.2 測試（shì）方法（fǎ）
本測試方法為計數濃度法，即通過收（shōu）集懸浮在空氣中的生物性粒子於專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若幹時間和適宜的（de）生長條件讓其繁殖（zhí）到可見的菌落計數，以判定該無菌室的微生物濃度。
4.3 測試儀器、輔助設（shè）備和培養（yǎng）基
浮遊菌采樣器、培（péi）養皿（選用與儀器相適應的（de）培養皿）、培養基、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.4 測試狀態（tài）及測（cè）試時間
4.4.1 靜態和動態兩種狀態均可進行測試，靜態測試時，室內測試人員（yuán）不得多於2人。
4.4.2 在靜態a測試時，單向流無菌室（區），測試在淨化空調係（xì）統正常（cháng）運行時間不少於10分鍾後開始；非單向流（liú）無菌室（區），測試在（zài）淨化空調係統正常運行不少於30分鍾後（hòu）開始。在靜態b測（cè）試時，單向流（liú）無菌室（區），測（cè）試在生產操作人員撤離現場（chǎng）並經過10分鍾自淨後（hòu）開始；非單向流無菌室（區），測試在生產操（cāo）作人員撤離現場並經過20分鍾自淨後開始。
4.5 采樣點的確定 
4.5.1 zui少采樣點數目見表1，每次zui小采樣量見表2。
表1 zui少采樣點數目（mù） ：

表2 zui小采樣量：

4.5.2 采樣點位置（zhì）布置宜力求（qiú）均勻，避免采樣點（diǎn）在局部區域過於稀疏，采樣點按（àn）照《潔淨區環境（jìng）監控管理規程》附件×××車間潔淨度監測采樣點（diǎn）布局圖（tú）的要求（qiú）布置，每個（gè）采樣點一般采樣一次。
4.5.3 工（gōng）作（zuò）區采樣點位置（zhì）離地（dì）0.8m~1.5m左右（略高（gāo）於工作麵），送風口測（cè）點位置離開（kāi）送風麵30cm左右，可在關鍵設備或關鍵工作活動（dòng）範圍處增加測點。
4.6 測試準備
4.6.1 采樣器在進入被測區域前先清潔表麵，然後用75%酒精消毒一遍或存放於被測區（qū）域內，與被測試區域一起消毒（用於*無菌室的采樣器必（bì）須預先放（fàng）在被測房間內）。
4.6.2 A/B級區采用一次性培（péi）養皿，其（qí）它區域按無菌操作要求，在中檢室潔（jié）淨工作台上提前製備培（péi）養備用（將滅菌後的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養皿每（měi）個傾注約20ml培養基，Φ150mm培每個（gè）傾注約30ml培（péi）養基），培養皿加蓋後在室溫下放至凝固。自製好的培養皿在無菌室內存放不超過48小時（shí），2~8℃保存的培養皿一般不超過1周（zhōu），一次性培養皿在標注的（de）有（yǒu）效（xiào）期內使用，過期不得使用。
4.6.3 A/B級區使用的（de）培養皿在區域（yù）消毒前一次性傳入，隨環境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內使用。若需臨時傳入，則（zé）必須在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞（dì）窗傳入B級區進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表麵也必須用75%酒精擦拭。其它區域用（yòng）培養皿按物品傳入要求當天傳入使用（yòng）。
4.6.4 采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉（zhuǎn）盤以及罩（zhào）子（zǐ）的內外麵（miàn）（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。
4.6.5 測試具體操作見“JYQ-Ⅱ型浮遊菌采樣器標準操作（zuò）程序或FKC-1型浮遊空氣塵菌（jun1）采樣器（qì）標準操作程序”。
4.6.6 采（cǎi）樣結（jié）束後，蓋（gài）上培養皿蓋子，在培養皿上標注所有信息（包括產品批號，放置（zhì）位置等），將培養皿用適宜的方式捆紮，倒置於30~35℃恒溫培養箱中培養，培養時間不少於2天。
4.6.7 培養結束後逐個檢查培養皿，用肉眼對（duì）培養皿上所有的菌落直接計（jì）數、標記，然後用（yòng）5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏（lòu）。若培養皿（mǐn）上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍（réng）以2個或2個（gè）以（yǐ）上（shàng）菌落計數。
4.7 測試記（jì）錄應包含以下內容
4.7.1 被測（cè）試區域（yù）名稱、測試（shì）日期、測試依據、測試者姓（xìng）名、測試儀器及測試方法的描述（shù），測試時所采用的狀態和室內（nèi）測試人員數，采（cǎi）樣點（diǎn）數目，測試次（cì）數、采樣流量，測試結（jié）果（包括所有統計計算資料）等。
4.7.2 若為動態測試（shì），還應記錄現場操作人員數量，現場設備運轉情況等。
4.8 結果計算
4.8.1 用計（jì）數方法得出各個培養（yǎng）皿的菌落數。
4.8.2 每（měi）個測點的浮遊（yóu）菌平均濃度計算按下式進行 。
4.9 結果（guǒ）評定
4.9.1 每個測點的浮遊菌平均濃度必須低（dī）於所選定評定（dìng）標準中的界限。
4.9.2 在靜態測（cè）試（shì）時，若某測點的浮遊菌平均（jun1）菌濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。
4.9.3 若有超過規定者，必須及時與（yǔ）生產部門，對該區域進行消毒或（huò）其它處理，然後（hòu）重新測（cè）試至（zhì）合格。
4.10 日常監控
4.10.1 浮遊菌日常監控設（shè）糾偏限（xiàn）度和（hé）警戒限度（限度（dù）範圍及取樣頻次見《潔淨區環境監控管理規（guī）程》），以保證無菌室（區）的微生物濃（nóng）度受到控製，定期檢測以檢查微生物負荷（hé）以及消毒劑的效（xiào）力，並作傾向分析。靜態和動態的監控都可以采用該方法（fǎ）。
4.10.2 對於浮遊（yóu）菌的取樣頻次，如果出現下列情況應考慮修改，在評估以（yǐ）下情況（kuàng）後，也應確定其（qí）他項目的檢測頻（pín）次。
——連續超過糾偏限度和警戒限度；
——停工時間比預計延長；
——關鍵區域內發現（xiàn）有汙染存在；
——在生產期間（jiān），空氣淨化係統進行任何（hé）重大的維修；
——日常操作記錄反映出傾向（xiàng）性的數（shù）據；
——消毒規（guī）程的改變；
——引起生物汙染的事故等；
——當生產設備有重大維修或增加設備時（shí）；
——當無菌室（區）結構或區（qū）域（yù）分布有重大變動時。
4.11 注意事項
4.11.1 JYQ-Ⅱ型浮遊（yóu）菌采（cǎi）樣器經消毒後先不放入培養皿，開啟浮遊（yóu）菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發，時間不少於5分鍾，檢查流量並根據采樣（yàng）量（liàng）調整（zhěng）設定采樣時間。
4.11.2 單向流無菌（jun1）室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向，非單向流無菌室（區），采樣口向上。
4.11.3 測試時必須穿著與被測區域潔淨度級別要求相適應並經高壓滅菌後的無菌服。
4.11.4 布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
4.11.5 采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內壁（bì）和（hé）轉（zhuǎn）盤（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保（bǎo）護蓋）。
4.11.6 應采取一切措施防止采樣過程的汙染和其他可能對樣本的汙染。
4.11.7 每（měi）批培養基（jī）應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染，可每批選定3隻培（péi）養皿（mǐn）作為對照培養（yǎng）；培養皿（mǐn）在用於（yú）檢測（cè）時，為避免培養皿（mǐn）運輸或搬動（dòng）過程造成的影響，宜同時進（jìn）行對照試驗，每次或每個區域取1個對（duì）照皿，與采樣皿同法（fǎ）操作但不需暴（bào）露采樣，然後與采樣後的培養皿一起放入培養箱中（zhōng）培養，結果（guǒ）應（yīng）無菌落（luò）生長。
4.11.8 采樣（yàng）前應仔細檢查每個培養皿的（de）質量，如（rú）發現變質、破損或汙染的（de）應剔除。
4.11.9 由於細（xì）菌種類繁多，差別甚大，計數時一般（bān）用透射光於於培養皿背麵或正麵（miàn）仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落或培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.11.10 必須定期對恒（héng）溫培養箱進行校驗。