微生物無塵車間（無菌室）的使用和管理

無塵車間（無菌室）是（shì）微生物檢測的重要（yào）場所與zui基本的設施，因此它的設計（jì）要按國（guó）家標（biāo）準《潔淨廠房設計規範》、國家藥品監督管理局頒發的《藥（yào）品檢驗所實驗室質量管理規（guī）範（試行）》中第十八條規定執行（háng）。微生（shēng）物實驗室無塵車間的施工、安裝、驗收應按國家行（háng）業標準《無塵車間的施工及驗收（shōu）規範》執行。對於微生物（wù）檢測工作者和使用管理（lǐ）者來講，更大（dà）量（liàng）的工作是（shì）進行正（zhèng）常管理到日常的使用。無塵車間（無菌室）的（de）標準要符合GMP潔（jié）淨度標準要求。
1、無塵車間（無菌室）要符合規範要求
無菌室應采光良好、避免潮（cháo）濕（shī）、遠離廁所及汙染區。麵積一般不超過10m2，不小於5m2；高度不超過2.4m。由1—2個緩衝間、操作間組成（操（cāo）作（zuò）間和緩衝間（jiān）的門不應直對），操作間和緩衝間之間應具備（bèi）滅菌功能的樣（yàng）品傳遞箱。在緩衝間內應有洗手盆、毛巾、無菌衣褲（kù）放置架及掛鉤、拖鞋等，不應（yīng）放置（zhì）培養箱和其他雜物；無菌室內應六麵（miàn）光滑平整，能耐受清洗（xǐ）消（xiāo）毒（dú）。牆壁（bì）與地麵、天花板連接處應呈（chéng）凹弧形，無縫隙，不（bú）留死角。操作間內不應安裝下水道。
無菌操作室（shì）應具有空氣除菌（jun1）過濾的單向流空氣裝置，操作區潔淨度100級或放置同等級別的超淨工作台，室內溫度控製18—26℃，相對濕（shī）度45%—65%。緩衝間及操（cāo）作室內均應設置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消（xiāo）毒裝置，空氣（qì）潔淨級別不同的相鄰房（fáng）間（jiān）之間的靜壓差應大於5Pa，無塵（chén）車間（區）與室（shì）外大氣（qì）的（de）靜壓差大（dà）於10Pa。無菌室（shì）內的照明燈（dēng）應嵌裝在天花板內，室內光照應分布均勻（yún），光照度不低於（yú）300lx。緩衝間和操作間所設置的紫外線殺菌燈（2—2.5w/m3），應定期檢（jiǎn）查輻射強度，要求在操作麵上（shàng）達40uw/m2。不符合要（yào）求的紫外殺菌燈應及時更換。
2、建立使用登記製度
在登記冊中可設置（zhì）以下項目內容：如使用（yòng）日期、時（shí）間、使用人、設備運行狀況、溫度、濕度、潔淨度狀態（沉（chén）降菌（jun1）數、浮遊（yóu）菌數、塵埃粒子數）、報修原因、報修結果、清潔工作（zuò）（台（tái）麵、地麵、牆（qiáng）麵（miàn）、天花板、傳遞窗、門把手）、消（xiāo）毒液名稱等。
3、建立使用標準（zhǔn）操作規範（SOP）並嚴格（gé）管理
（1）規定淨化係統使運（yùn）轉時間要求每次實驗前應（yīng）開啟淨化係統使運轉至少1h以（yǐ）上，同時開啟淨化台和紫外燈。
（2）物品（pǐn）進入無塵（chén）車間（無菌室）基本要（yào）求：凡進入無塵車間（無菌室）的物品必須先在*緩衝（chōng）間內對（duì）外部表麵用消毒劑消毒滅菌，再經物流緩衝間、傳遞窗1h以上，及（jí）無菌空氣（qì）吹（chuī）幹後送入無菌室。注意帶纖維、易發（fā）塵物品不（bú）得帶進淨化實驗室。無菌室內固定物品不得（dé）任意搬出。
（3）人員進入無塵車間（無菌室（shì））要求：實驗人員進入無塵車間（無菌室）不得化妝、帶手表（biǎo）、戒指等首飾；不得吃東西、嚼口（kǒu）香糖（táng）。應清潔手後進入*緩衝間更衣，同時換上消毒隔離拖鞋，脫去外衣，用消毒液消毒雙手後（hòu）戴上無菌手套（tào），換上無菌連衣帽（mào）（不得讓頭發、衣等暴露在外麵），戴上無菌口（kǒu）罩。然後戴（dài）上第二副無菌手套，在進入第二緩衝間時換第二雙消毒隔離（lí）拖鞋。再經風淋室30s風淋後進入無菌室。
（4）溫濕度觀察（chá）要求：觀察溫度計、濕度計上顯示的溫（wēn）濕度是否在規定的範圍內，並作為實驗原始數據記（jì）錄在案。如發現問題應及時尋找原因，及時報修和及時報告實（shí）驗室主管，並（bìng）將報修原因和結果記錄歸檔。
（5）沉降菌落計數與（yǔ）浮（fú）遊菌測定要求：在每次實（shí）驗同時，對操作室和層（céng）流台做微生物沉降菌落（luò）計數，將結果記錄在使用登記本上，並作為實驗環境原始數據記錄在實（shí）驗報告上。每周1次，或在無菌檢查等必要時（shí），在每次實驗同時對操作室和淨化台進行浮（fú）遊（yóu）菌測定，將結果記錄在（zài）使用登記本上，並作（zuò）為實驗（yàn）環境原始數據記錄在實驗報告上（shàng）。
（6）消毒要求：無菌室每周和每次操作（zuò）前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液（常用消毒劑的品種有：5—20倍（bèi）稀（xī）釋的碘伏水溶液、0.1%新潔爾滅溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液（yè）、3%碘酒溶液、5%石炭酸（來蘇兒）消毒溶（róng）液、2%戊二（èr）醛（quán）水溶液、尼泊金乙醇消（xiāo）毒液（處方：對羥基苯甲酸甲酯（zhǐ）21.5g；對羥基（jī）苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒劑品種與使（shǐ）用要進行有效性驗證方可使用，並定期更換消毒劑的品種）擦拭操作台及（jí）可能汙染的死角（jiǎo），方法是用無菌紗布浸漬消毒溶液清潔超淨台的整個內表麵（miàn）、頂麵、及無菌室、人流、物流、緩衝間的地板、傳遞窗、門把手。清（qīng）潔消（xiāo）毒程序（xù）應從內向外（wài），從高潔淨區到低潔淨（jìng）區。逐步向外（wài）退出潔淨區域。然後開啟無菌空（kōng）氣（qì）過濾器及紫外燈殺菌1—2h，以殺滅存留微（wēi）生物。在每次操作完畢，同樣用上述（shù）消毒溶液擦拭工（gōng）作台麵，除（chú）去室內濕氣，用紫（zǐ）外（wài）燈殺菌30min。
（7）其他要求（qiú）：如遇停電應立（lì）即停止實驗，離開無菌室（shì），關閉所有電閘。重新（xīn）進入無菌室前至（zhì）少開啟（qǐ）機房運轉1h以上。
4、潔淨度檢查的要求與方（fāng）法
無菌室在消毒處理後，無菌試驗前（qián）及操作過程中需檢查空氣中菌落數，以（yǐ）此（cǐ）來判斷（duàn）無菌室是（shì）否達到規定的潔淨度，常有沉降（jiàng）菌和浮遊菌測（cè）定方法。
（1）沉降菌檢測方法及標準：以無菌方式將3個營養瓊脂平（píng）板帶（dài）入無菌操作室，在操作區台麵左、中、右各放（fàng）1個；打開平板蓋，在空氣中暴露30min後將平（píng）板蓋好，置32.5℃士2.5℃培養48h，取出（chū）檢查，3個平板上生長的菌落數平均小於1個。
（2）浮遊（yóu）菌檢測方法及（jí）標準：用專（zhuān）門的采（cǎi）樣器，宜采用撞擊法機（jī）製的采樣（yàng）器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，並配有流量計和定時器（qì），嚴（yán）格按儀器說明（míng）書的要求操作並定時校檢（jiǎn），采樣器和培養皿進入被測房間（jiān）前先用消毒房（fáng）間（jiān）的消毒（dú）劑滅菌，使用的培養基為營養（yǎng）瓊脂培養基（jī）或藥典認可的其他培養基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少於5min，調節流量、轉盤、轉速。關閉真空（kōng）泵，放入培養皿，蓋上采樣器蓋子（zǐ）後調節縫隙高度。置采（cǎi）樣（yàng）口采樣點後，依次開啟采樣器、真空泵，轉動定（dìng）時器，根據采（cǎi）樣量設定采（cǎi）樣時間。全部采樣結束後，將培養（yǎng）皿置32.5℃士2.5培養48h，取出檢查，浮遊菌（jun1）落數平均不（bú）得超過5個（gè）/m3。每（měi）批培養基應選定3隻培養皿做對照培養。無菌操作（zuò）台麵或超淨工作（zuò）台（tái）還（hái）應定期檢測其（qí）懸浮粒子，應達到100級（一般用塵埃粒子計數（shù）儀）檢測，並根（gēn）據無（wú）菌狀況必要時置換（huàn）過濾器
5、定期進行潔淨度（dù）再驗證
定期（每季度、半年、1年）或（huò）當（dāng）無塵車（chē）間（jiān）設施發生重大改變時（shí），要按國家標（biāo）準GB/T16292-16294-1996《醫藥工業無塵車間（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的測試方法》進行（háng）潔淨度再驗證，以確保潔淨度符合規定，保存驗證原始記（jì）錄，定期歸檔保（bǎo）存，並將驗證結果記錄在（zài）無（wú）菌（jun1）室使（shǐ）用登記冊上，作為實驗環境原始依據及趨勢分析資料。並（bìng）定（dìng）期（qī）對無塵車間的環境檢測數據進行趨勢（shì）分（fèn）析和評估，根據評估結果，了解無（wú）塵車間設（shè）施環（huán）境質量的穩定狀況及變化趨勢，決定是否有必要修訂相應的警（jǐng）戒和糾偏限（xiàn）度。
6、定期更換新的紫外燈管
定期更換淨化係統的初效、中效、（至少每年1次），以確保淨化係統的功能持續（xù）有效；更換（huàn）新的紫外燈管，以確保（bǎo）紫外燈（dēng）管滅菌持續有效。並同時在使（shǐ）用登記本（běn）上（shàng）做（zuò）好更換記錄（lù），定期歸檔保（bǎo）存，至少2年1次（cì），或按潔淨（jìng）度驗證實際情況。
7、使用（yòng）過程中（zhōng）應盡可能減少人員的走動或活動
平時（shí）實驗室內應盡可能減少（shǎo）人員的走動或活動，同向無塵（chén）車間的門要關閉或安裝自動閉門（mén）器使其保持關閉狀態。
8、潔淨度不符合規定時立（lì）即停止（zhǐ）使用
發現潔淨度不符合規（guī）定時，應立即停止使用，尋找原（yuán）因，*清潔、必須經潔淨度再驗證符合規定後，才再使用，並同時將情況（kuàng）記錄在無菌室使用登記冊上，定期歸檔保存。
9、對進入的外來人員或維修人員進行指導和監督
非微生物（wù）室檢驗人員不（bú）得進入無塵車間（無菌室），對必須進入的外來人員或維修人員要進行指（zhǐ）導和監督。
10、無塵車間（無菌室）的日常管理
建立安全衛生值日製（zhì）度，一旦發現通（tōng）風係統、牆壁、天花板（bǎn）、地麵、門窗及公用介質係統等設施有損壞現象，要及時報告並采取相應的修複措施，並（bìng）保存記錄及時歸檔。從無塵車（chē）間（無菌（jun1）室）環境中檢測到的微生物應能鑒別至屬或種，保留鑒（jiàn）別實驗原始記錄及菌種，作為無菌生產、無菌檢查（chá）無塵車間環境質量、消毒劑有效性評估及汙染源調查的依據。